承德及周边地区野生菌采集鉴定及生物学活性农业分析

来源: www.sblunwen.com 发布时间:2020-03-25 论文字数:35524字
论文编号: sb2020032322003830066 论文语言:中文 论文类型:硕士毕业论文
本文是一篇研究农业的论文,本论文对承德市及周边地区野生食用菌进行了鉴定和生物学活性分析,在鉴定过程中,传统形态学鉴定作为基础,分子学鉴定对 NCBI 数据库中序列不规整,测得的
本文是一篇研究农业的论文,本论文对承德市及周边地区野生食用菌进行了鉴定和生物学活性分析,在鉴定过程中,传统形态学鉴定作为基础,分子学鉴定对 NCBI 数据库中序列不规整,测得的 ITS 序列有较多的杂带,希望今后得以完善。对于有价值的 6 株野生菌需要进一步研究培养配方从而进行人工驯化。本论文对河北省承德市及周边地区的野生食用菌进行了采集鉴定以及对生物学活性物质进行了测定,主要进行了野外采集菌株子实体,形态鉴定,组织分离,菌丝体生长速度测定,DNA 提取及 ITS 序列扩增测序建立系统发生树,野生菌株的多糖、蛋白质、漆酶、抗菌活性等生物学活性物质的测定。

第 1 章 文献综述

1.1 食用菌的种类及价值
1.1.1 食用菌的种类
近年来,我国食用菌发展突飞猛进,在世界食用菌发展中名列前茅[1]。食用菌的种类繁多,中国已知的有 936 种,分别隶属于 41 科,132 属,其中担子菌占 94.4%,子囊菌占 5.6%,商业化栽培的就有大约 60 多种[2-6]。。吴志雄[7]对福建食用菌产业发展现状进行了调研,发现福建已经成功选育并且驯化的品种达40 余种。桂明英、徐俊[8]对云南食用菌的种类进行了总结,云南省食用菌共 11个目,35 科,100 属,大约 600 多种,占世界食用菌资源的 30%,占我国食用菌资源的 86.7%。中国幅员辽阔,气候独特,为食用菌的生长提供了良好的环境。
1.1.2 食用菌的食药用价值
食用菌是一种低热量,高蛋白的食品,富含蛋白质、糖类化合物、脂类物质、维生素、矿质元素。食用菌中蛋白质含量是其干重的 13%-46%,比蔬菜水果的蛋白质含量高出很多,可以与肉蛋相媲美。研究发现[9],1 kg 干菇的蛋白质含量就相当于瘦肉 2 kg、鸡蛋 3 kg、牛奶 12 kg,每 100 g 猴头菇的蛋白质含量为 26.3g[10],每 100 g 鲜木耳蛋白质含量为 10.6 g[11-12],每 100 g 香菇所含蛋白质 26 g[13],滑子菇的蛋白质含量为 24.35%[14-15],双孢菇的蛋白质含量高达 42%[16]。食用菌中氨基酸含量非常丰富,氨基酸的种类有 17-18 种,人体内所必需的氨基酸有 8种,氨基酸总量为 10.71%-24.81%,人体内 8 种必要的氨基酸在总氨基酸中占30%-50%,金针菇中的亮氨酸和赖氨酸能够促进儿童成长和智力发育,牛肝菌中的谷氨酸促进人们的食欲,羊肚菌中几种稀有氨基酸是其风味奇鲜的主要成分,香菇、草菇和平菇的氨基酸含量与啤酒酵母和鸡蛋相差无几[17],每 100 g 干灰树花 17-18 种氨基酸含量就达到 18.68 g,其中人体必需的 8 种氨基酸含量占45.5%,特别是里面的色氨酸含量高出其他食品 5-8 倍,苏氨酸高出 1.5-2.7 倍[18]。食用菌中糖类化合物具有单糖、双糖及淀粉含量低,多糖和膳食纤维含量较高等特点[19]。食用菌中所含脂类物质较低,多为不饱和脂肪酸[20],可以延缓衰老,清理血液中垃圾,使胆固醇下降,对预防心脑血管疾病非常有效。维生素是人身体不可缺少的微量元素,在人身体不能合成,必须体外供应,食用菌中所含维生素种类很多,
VA、VB、VC、VK、VE、VD、烟酸、叶酸、泛酸、生物素等,每 100 g 干品羊肚菌含 VB13.92 mg、VB224.6 mg、生物素 0.75 mg、泛酸 8.7 mg、叶酸 3.84 mg、烟酸 82 mg[21],每 100 g 鲜草菇所含 VC206.27 mg,而每 100 g 鲜橙所含 VC 也只有 76-185 mg,所以食用菌中的这些维生素含量高于一些富含 VC的水果和蔬菜,另外食用菌中所含的 VB12 比肉还高,因此可以防止恶性贫血,改善神经功能[22]。矿物质在食用菌含量也非常丰富,金针菇所含的矿物质就有47 种,每 100 g 鲜木耳含有 Fe185 mg,比叶菜类芹菜所含的铁高出 20 倍,比动物食品猪肝所含的铁高出 7 倍[23],香菇灰分元素所含钾达到 65%。
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1.2 野生食用菌开发及应用现状
1.2.1 野生食用菌的资源
食用菌是一类人们可以食用大型真菌,种类繁多,据专家统计全世界就有200000 种以上的大型蕈菌,其中包括 140000 种可以食用或者药用。目前已知的约 14000 种,其中已知的食用菌有 5000 余种,来源于 31 个属的 3000 余种蕈菌被作为食用菌。但是在这些种类里可以试验性栽培的只有 200 种,经济性栽培的有 100 种,已经商业化栽培的大约有 60 余种,有 10 多个国家已经工业规模栽培。另外,大概有 2000 种蕈菌具有药用价值。有毒的蕈菌约占总蕈菌的 1%,数量很少,其中 30 种有毒的蕈菌可以导致人死亡。中国幅员辽阔,地形复杂,气候多样,为野生菌的生长提供了优良的环境[36]。中国是世界上食用菌和药用菌资源最丰富的国家,经过科学家们百年来对中国的野生蕈菌资源调查研究,全国大型真菌有 2000 种以上,其中可以食药用的有 1000 多种,有 150 多种被驯化成功,商业化栽培的有 50~60 种,出口外汇的有 10~20 种,进行菌丝体发酵培养的有30 余种,共计 90 多种,在世界排名第一位[37-39]。
国外野生菌资源也非常丰富,主要集中在亚洲东部、北美以及西欧地区。例如德国野生菌资源有 25 科,50 属左右,580 余种。美国的野生菌资源有 38 科,134 属,800 余种。加拿大有野生菌资源 260 多种。图力古尔等展开了对俄罗斯远东地区、基洛夫、新西伯利亚周边地区和阿尔泰共和国等地区的野生食用菌资源实地调查,发现野生菌资源 180 种[40-43]。墨西哥野生菌资源有多洼马鞍菌、短柄红菇、赭色鹅膏菌、金黄枝珊瑚菌、美洲松茸、蓝绿乳菇等等[44]。有关文献记载了土著人使用食用菌的情况,马拉西亚的伊班人、和拉毕人共食用 57 种菌,巴布亚新几内亚人食用 59 种,墨西哥伊斯特兰的萨巴特克人共食用 37 种野生食用菌[45-47]。
技术路线图
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第 2 章 野生食用菌的采集与形态鉴定

2.1 材料和方法
2.1.1 采集工具
当地的地图、GPS、铅笔、刻度尺、卷尺、直尺、记录本、照相机、采集刀、放大镜、采集袋、塑料袋、锡箔纸袋、背筐、记号笔、号牌、图鉴及参考书。
2.1.2 采集方法
本次采集野生食用菌选择承德市及周边地区,主要在迁西县(东经 118°6′~118°37′,北纬 39°57′~40°27′)、承德市(北纬 40°12′~42°37′,东经 115°54′~119°15′)、围场县(东经 116°32′~118°14′,北纬 41°35′~42°40′)、三个地区进行采集。由于以上地区气候、降水、温差等原因,选择在 8 月份进行采集,在雨后的 2~3 天进行,此时采集的菌类干燥而不老化萎缩,有利于菌种的分离。采集过程中发现子实体,要先进行拍照,分别对环境、整体、表面、菌褶、菌柄等部位进行拍照。拍照完毕后,进行采集,采集时要特别注意保持子实体的完整性,
要用小铲进行挖掘,不能用手拔,以免损坏基部。采集后栓好编号纸牌,放入塑料袋或者纸盒中。
2.1.3 形态鉴定方法
采集后野生菌进步初步的分类,通过子实体的菌盖、菌托、菌柄、菌褶、菌环等形态特征进行分类,鉴定标准为:菌盖的颜色、直径以及形状;菌柄的长度、形状及颜色,是否空心;是否有菌托存在;菌褶的颜色及生长状态;分类后逐一进行观察,测量等,最后通过当地的俗称以及图鉴资料进行初步命名。
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2.2 结果与分析
2.2.1 野生食用菌采集
此次野生食用菌野外采集标本,在承德周边地区,主要选择具有代表性的区域,在承德市,围场县,与承德市临近的迁西县,三个区域共采集当地具有代表性的野生菌 12 种,采集后对子实体的生长环境与形态进行拍照记录,并小心的进行采集,将野生菌子实体包装好,带回实验室进行鉴定。
2.2.2 野生食用菌形态鉴定
对采集的 12 种野生食用菌子实体进行初步的传统形态学鉴定,对菌柄、菌盖、菌褶、菌托仔细观察以及测量,然后查阅文献资料进行鉴定。
食用菌形态
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第 3 章 野生食用菌的组织分离及菌丝生长速度测定......................24
3.1 材料与方法..................................24
3.1.1 试验材料..............................24
3.1.2 试验方法...........................24
第 4 章 野生菌种 ITS 鉴定及系统进化树的建立..................................27
4.1 材料与方法..................................27
4.1.1 试验材料...............................27
4.1.2 试验方法....................................28
第 5 章 野生食用菌生物学活性分析...........................37
5.1 材料与方法........................................37
5.1.1 试验材料............................................37
5.1.2 试验方法............................38

第 5 章 野生食用菌生物学活性分析

5.1 材料与方法
5.1.1 试验材料
5.1.1.1 供试菌株
供试 6 个野生菌株详见表 4-1
5.1.1.2 主要试剂
ABTS、冰乙酸、磷酸二氢钾、硫酸镁、葡萄糖、去离子水、蒸馏水(漆酶所用);硫酸铜、硫酸钾、硼酸、甲基红指示剂、溴甲酚绿指示剂、亚甲基蓝指示剂、氢氧化钠、95%乙醇(凯氏定氮所用);牛血清蛋白、乙醇、考马斯亮蓝、磷酸、蒸馏水(考马斯亮蓝所用);硫酸、无水乙醇、苯酚、80%乙醇溶液、葡萄糖(苯酚硫酸测多糖所用);大肠杆菌、金葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、磷酸二氢钾,硫酸镁、葡萄糖、琼脂粉(抗菌活性所用)。
表 4-1 供试野生菌株
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结论与展望

结论
本论文对河北省承德市及周边地区的野生食用菌进行了采集鉴定以及对生物学活性物质进行了测定,主要进行了野外采集菌株子实体,形态鉴定,组织分离,菌丝体生长速度测定,DNA 提取及 ITS 序列扩增测序建立系统发生树,野生菌株的多糖、蛋白质、漆酶、抗菌活性等生物学活性物质的测定。主要结论总结如下:
(1)在 2018 年夏季 8 月份进入河北省承德市境内,选择了具有特点的四个区域,分别为承德市,与承德市距离较近的迁安,森林草原植被茂盛的承德市围场满足蒙古自治县,以及与围场满族蒙古族自治县接壤的内蒙古地区。对四个区域进行实地野生菌的采集,做好野生菌株的形态及生长环境的记录和拍照。采集完毕后妥善保存野生菌株,对已经采集的 12 株野生菌进行形态分析,并查阅资料,发现采集的 12 株野生菌株分别为 chengde1 是伞菌科鬼伞属中的墨汁鬼伞;chengde2 是多孔菌科栓菌属中的血红密孔菌;chengde3 是多孔菌科栓菌属中的云芝,与 weichang2 相似,都属于栓菌属种的云芝;weichang1 是齿耳菌属的强壮齿耳菌;weichang3 是硬马勃菌科硬马勃菌属中的网纹马勃;weichang4 是珊瑚菌科的珊瑚菌;weichang5 是多孔菌科层孔菌属的木蹄层孔菌;weichang6 是伞菌科的蒙古口蘑;weichang7 与 qianxi1 均为牛肝菌科的牛肝菌;qianxi2 是鬼笔科鬼笔属的粉托鬼笔。
(2)随后进行野生菌株的组织分离及菌丝生长速度的测定,在组织分离后发现 12 株野生菌株 weichang7、qianxi1 没有分离出菌丝,原因可能是牛肝菌的菌丝难以获得,剩余 10 株菌丝已经长满试管。对 10 株长满菌丝的野生菌株进行菌丝体生长速度的测定,结果发现 chengde1、chengde2、chengde3、weichang1、weichang2、qianxi2 菌丝生长速度较快,菌丝生长强壮,weichang3、weichang4、weichang5、weichang6 这四株菌丝生长缓慢,菌丝长势较弱,因此对生长速度较慢,菌丝体质量较差的野生菌株淘汰。
参考文献(略)


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